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液相色譜柱的維修與保養(yǎng)
點(diǎn)擊次數(shù):3676 更新時(shí)間:2017-08-31
  分析液相色譜柱的維修與保養(yǎng)
 
  一、液相色譜柱的維護(hù):
 
  我們?cè)谑褂眯碌纳V柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試,即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來測(cè)定該色譜柱的柱效。并且,在以后的使用中,應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現(xiàn)象,造成這種現(xiàn)象的主要原因是①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進(jìn)樣器等中的不溶物④ 柱內(nèi)不溶物的形成等。如果當(dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對(duì)色譜柱進(jìn)行修復(fù),先,使用含鹽緩沖液后(如離子對(duì)試劑)應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑(如水)進(jìn)行沖洗。其次,先斷開檢測(cè)器,然后用對(duì)來自樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗,對(duì)于反相色譜柱,可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等,在此條件下,應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。zui后如果經(jīng)過上述還是沒有修復(fù),色譜柱壓力還是沒有下降,則要斷開檢測(cè)器,將色譜柱反方向放置,然后檢查柱壓,若壓力穩(wěn)定下降,則保持色譜柱反方向連接,用低于0.5 ml/min 流速?zèng)_洗一小時(shí)。如果壓力不下降,則要看內(nèi)置過濾器是否被堵塞,如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換,若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞,柱子將不可能被*恢復(fù),只能通過去掉進(jìn)口端的部分填料,重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm
 
  二、液相色譜柱的保養(yǎng):色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是*條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。我們?cè)趯?duì)色譜柱使用前進(jìn)行測(cè)試以后,我們要根據(jù)不同的情況對(duì)色譜柱進(jìn)行保養(yǎng):①反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng):使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。②長(zhǎng)期保存色譜柱:如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲(chǔ)存于水(含防腐劑*或柳硫汞)中,并將購(gòu)買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度是室溫.
 
  三、 液相色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)在液相色譜儀中的應(yīng)用:液相色譜(HPLC)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù),是現(xiàn)代分離測(cè)定的重要手段。問世以來,因其具有分離效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。液相色譜柱是消耗品,會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加,出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰,柱效下降。需要定期進(jìn)行*清洗和再生,不同的色譜柱清洗方法各不相同比如:
 
  1.反相柱 分別用甲醇:水=90:10,純甲醇(HPLC級(jí)),異丙醇(HPLC級(jí)),二氯甲烷(HPLC級(jí))等溶劑作為流動(dòng)相,依次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
 
  2. 正相柱 分別用正己烷(HPLC級(jí)),異丙醇(HPLC級(jí)),二氯甲烷(HPLC級(jí)),甲醇(HPLC級(jí))等溶劑做流動(dòng)相,順次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于 20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。
 
  3.離子交換柱 長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

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